一、目的和要求：
（1）了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式
（2）了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理
（3）学习集中常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法
二、实验内容：
（一）双缩脲反应：
1、操作方法：取一支试管,加入卵清蛋白溶液约1毫升和10％NaOH约2毫升,摇匀,再加1％CuSO4溶液两滴,随加随摇.观察是否有紫玫瑰色的出现.
2、试剂：（1）10％NaOH；（2）1％CuSO4；（3）2％卵清蛋白溶液
（二）茚三酮反应：
1、操作方法：
（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升,再各加0.5毫升0.1％茚三酮溶液,混匀,在沸水浴中加热1—2分钟,观察颜色是否由粉红色 变紫红色再变蓝色.
（2）在一块小滤纸上滴一滴0.5％的甘氨酸溶液,风干后再在原处滴一滴0.1％茚三酮乙醇溶液,在微火旁烘干显色,观察是否有紫红色斑点的出现.
2、试剂：
（1）0.5％甘氨酸溶液；
（2）0.1％茚三酮水溶液；
（3）0.1％茚三酮—乙醇溶液；
（4）蛋白质溶液：2％卵清蛋白或鸡蛋青溶液（蛋青：水＝1：9）
（三）黄色反应：
1、操作方法
    向6个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象,有的试管反应慢可稍放置一会或微火加热,待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入10％NaOH溶液至碱性,观察颜色变化.

管号	1	2	3	4	5	6
材料	鸡蛋清液	指甲	头发	0.5％苯酚	0.3％色氨酸	0.3％酪氨酸
（滴）	4	少许	少许	4	4	4
浓硝酸（滴）	2	20	20	4	4	4
现象
加入NaOH呈碱性后现象变化

（四）坂口反应：（可定性鉴定含有精氨酸的蛋白质和定量测定精氨酸）
1、操作方法：向各管中按下表加入试剂,记录出现的现象

试剂  管号	H2O	0.3％ 色氨酸（滴）	蛋白质 溶液（滴）	冰醋酸（ml）	浓硫酸（ml）	现象记录
1			5	2	1
2	4	1		2	1
3	5			2	1

2、试剂：（1）0.3精氨酸；（2）蛋白质溶液（鸡蛋清：水＝1：20）；（3）20％NaOH；（4）NaBrO溶液：2克溴溶于100ml5％NaOH中,置棕色瓶中,可在暗处保存两周；（5）1％α－萘酚乙醇溶液,临用时配制
（五）乙醛酸反应：
1、操作方法：取3支试管,编号,分别按下表加入蛋白质溶液,色氨酸溶液和水,然后各加入冰醋酸2毫升,混匀后倾斜试管,沿壁分别缓慢加入浓硫酸约1毫升,静置,观察各管液面紫色环的出现,若不明显,可于水浴中微热.
2、试剂：（1）蛋白质溶液（鸡蛋清：水＝1：20）；（2）冰醋酸；（3）0.3％色氨酸溶液；（4）浓硫酸（分析纯）
（六）偶氮反应：
1、操作方法：取三支试管,编号,按下表所示顺序和剂量加入试剂,并观察有色产物形成.
2、试剂：（1）鸡蛋清；（2）0.3％组氨酸溶液；（3）0.3％酪氨酸溶液；（4）20％NaOH；（5）偶氮试剂：溶液A：5克亚硝酸钠溶于1000ml水中；溶液B：5克对氨基苯磺酸溶于1000ml水中,溶解后再加入5ml浓硫酸.A、B溶液分别保存在密闭瓶中,用时以等体积混合.
（七）醋酸铅反应：
1、操作方法：向试管中加入10％醋酸铅溶液1毫升,再加10%NaOH至产生的沉淀完全溶解为止,摇匀.加入被水稀释一倍的鸡蛋清0.4毫升,混匀,小心加热,至溶液变黑后,加入浓盐酸数滴,嗅其味,并将湿润醋酸铅试纸置于管口,观察其颜色的变化.
2、试剂：（1）蛋白质液（鸡蛋清：水＝1：1）；（2）10％NaOH；（3）浓盐酸；（4）醋酸铅试纸,用10％醋酸铅水溶液浸泡滤纸后晾干.
三、注意事项：
1、实验内容繁多,请认真预习、操作
2、操作请按步骤进行
四、思考题：
1、如果蛋白质水解后双缩脲反应呈阴性,对水解作用的程度可作出什么结论？
2、茚三酮反应的阳性结果为何颜色？能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质存在？
3、黄色反应的阳性结果说明什么问题？
4、为什么蛋清可作为铅或汞中毒的解毒剂？