ABC 免疫酶染色法即卵白素 - 生物素 - 酶复合物,是目前最敏感的免疫细胞化学染色法之一.其基本原理是将特异性一抗与组织细胞相应抗原结合后,通过生物素花桥与一抗结合,借助卵白素与生物素的天然亲和性将生物素化辣根过氧化物酶链接为复合物,通过酶促反应,显示组织细胞相应的抗原.
1 、使用的主要材料：
    PBS ； T-ris-HCl 缓冲液；底物溶液； ABC 试剂盒；小鼠（兔）特异性抗体；盖片染色缸.湿盒,显微镜等.
2 、染色的基本步骤：
1)细胞准备于固定同免疫荧光染色法.
2)取已固定的细胞盖片,用 PBS 洗 5min ,浸入 37 ℃ 的 0.75%H2O2-PBS 中 3min ,以阻断内源性过氧化物酶.
3)PBS 振洗 2 次,每次 3min .
4)滴加正常马血清,在湿盒内, 37 ℃ 保温 30min ,以消除非特异性染色.
5)弃去正常马血清,滴加小鼠特异性抗体,在湿盒呢 37 ℃ 保温 30-60min 或 4 ℃ 过夜.
6)PBS 振洗 2 次,每次 3min .滴加生物素化马抗小鼠 IgG, 在湿盒内 37 ℃ 30min .
7)PBS 振洗 3 次,每次 3min ,滴加 ABC 试剂,在在湿盒内 37 ℃ 30min.
8)PBS 振洗 2 次, THB 振洗 1 次,每次 3min ,浸入新鲜配制的底物溶液,在室温下置暗处 10-20min .
9)自来水洗 5min
10)细胞核染色.浸入苏木精染液染色 2min ,自来水洗,迅速过盐酸酒精溶液,自来水洗,过氨水溶液,自来水洗.
l1)逐级脱水.过 70% 酒精 1 次, 95% 酒精 2 次,无水乙醇 3 次,每次 1min .
l2)透明,过二甲苯溶液 3 次,每次 1min .
l3)将有细胞的面向下,用中性树脂封片.
    此种染色方法同免疫荧光染色法一样,也应设置阳性对照、阴性对照、空白对照及抑制试验.空白对照用 PBS 做一抗.抑制试验是将待检标本与未标记特异性抗体反应后,再用自己标记的特异性抗体进行染色,结果阳性强度减弱或转为阴性.其注意事项同免疫荧光染色法.
    此法染色结果在光镜下观察,阳性部分呈棕褐色.

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