此法基本原理是将已知抗体或抗原标记荧光素,用此特异性试剂,浸染含有相应抗原或抗体的组织细胞标本,借助抗原抗体的特异性结合,于抗原或抗体的存在部位呈现荧光,从而可以定位标本内的抗原或抗体.
1、主要使用材料：
l) 0.01mol/L PBS.称取NaCl 8g,Na2HPO4 15g,KH2PO4 0.2g,加蒸馏水至1000ml溶解后,调pH至7.2.
2) 0.5mol/L碳酸盐缓冲液（CB）.称取Na2HPO4 3.7g,Na2CO3 0.6g,加蒸馏水至1000ml溶解后,调pH至9.5.
3) 50%缓冲甘油.1份纯甘油1份CB.
4) 义文蓝.称取伊文蓝1g,加入100mlPBS中,溶解后加1ml 1%Na2CO3过滤；4℃保存.临用前取0.1ml,加9.9ml PBS稀释成0.01%浓度使用.
5) 特异性抗体（一抗）,荧光素标记抗体（二抗）.
l6)染色缸、湿盒、振荡仪、荧光显微镜.
2、染色的基本步骤：
l) 细胞准备.将7mm x 22mm盖片置于培养瓶中,加入对数生长期细胞悬液于培养瓶中,待细胞长成单层,取出盖片,用PBS洗2次；悬浮生长的细胞离心后用PBS离心洗涤2次,制成细胞涂片.
2) 细胞固定.用醋酸/甲醇或95%酒精固定20-30min.
3) 将固定的细胞盖片置入盖片染色缸,用PBS振洗5min,取出吹干.
4) 滴加稀释的荧光素标记抗体（0.01%伊文蓝溶液稀释）,在湿盒中37℃保温30-60min.
5) PBS振洗2次,每次5min,然后用蒸馏水振洗1次.
6) 用50%缓冲甘油封片.
    标本染色后应及时观察并照相,若暂时无时间则应将标本放入4℃冰箱保存.但过夜后特异性荧光会减弱.如用聚乙烯醇封片,则保存时间可适当延长.制标本和染色时必须设立阳性对照、阴性对照、空白对照及抑制试验,以排除非特异性染色.要控制显色反应时间,以阳性反应着色最强,而有的是刚开始着色为佳.滴加抗体的量要适当,防止液体干涸.
    此种染色法在显微镜下观察,阳性部位出现荧光.荧光素种类不同可出现不同颜色的荧光.如异硫氰酸荧光素呈黄绿色荧光,罗丹明B220呈橙红色荧光.

相关阅读：
科学家描述HIV中和抗体的神奇画面
生物学家创造新HIV中和抗体,效能增强
人类血小板抗原1～4系统基因分型
半抗原——载体连接方法