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基因组文库的扩增

发布时间 2010-01-15 浏览量 作者: 无 来源: 生物无忧

材料:
    缓冲液和溶液:
        氯仿
        SM
    培养基:
        LB 或 NZCYM 琼脂平板( 150mm )
        LB 或 NZCYM 顶层琼脂糖
    离心机和转子:
        Sorvall SS-34 或相当型号
专用设备:
        预置于 47 ℃ 的加热设备或水浴
        载体和菌株
        λ 噬菌体文库
        大肠杆菌铺平板细菌
方法:
1、 为了扩增 λ 噬菌体文库,将含 10000-20000 个重组噬菌体的 50ul 或更少体积的多个包装混合物组分与 0.2ml 铺平板细菌在 13*100nm 试管中混匀, 37 ℃ 温育 20min .
2、 加 6.5ml 已融化的 47 ℃ 的琼脂或琼脂糖至感染细胞的第一个试管中,通过轻拍或温和地涡旋振荡混匀,立即倒入新鲜灌制的 150nm 平板内的底层琼脂上.对余下的感染细胞重复该过程.
3、 将平板于 37 ℃ 最长放置 8-10h .
4、 在平板中加入 12ml SM( 如果用烤盘,则加 150ml) , 4 ℃ 水平放置过夜.
5、 将所有平板中的 SM 都收集至一个单独的无菌聚丙烯离心管或瓶子中.每个平板再加 4ml SM 进行冲洗,与最初回收的 SM 液合并.加入 0.2ml 氯仿至回收的扩增噬菌体培养物中,室温放置 15min ,并偶尔轻轻摇晃时氯仿裂解所有的感染细胞.
6、 4 ℃ 4000g ( 5800r/min 在 Sorvall SS-34 中)离心 5min ,去掉细胞核琼脂糖碎片.
7、 将上清转移至新的无菌试管或瓶子中.将扩增噬菌体文库分为数个组分, 4 ℃ 保存.至噬菌斑分析测定文库滴度.

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