本方案介绍通过了 α 互补鉴定重组质粒的方法.显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合,与融化的顶层琼脂混合后铺于选择培养板.如来源受限,所需体积的 X-gal 也可直接铺于琼脂板订餐.在顶层琼脂内细菌的转化效率略高琼脂表面.这或许是因为转化的细菌偏爱软琼脂中略缺乏氧的环境或由琼脂培养基提供的等摩尔浓度状态.有以下对照：
    ①、合成半乳糖苷酶 ω 片段的大肠杆菌.理想的对照是原代未转化菌的秦代,转化菌的菌落由此衍生.原代未转化菌的菌落都应为白色.
    ②、由携带半乳糖苷酶 α 片段编码基因的空质粒所转化的菌同样是 ω 产生菌.这些菌的菌落都应为蓝色.
    ③、用 λ 噬菌体和 M13 噬菌体载体进行 α 互补筛选.
材料：
    缓冲液和溶剂：
        IPTG 溶液（ 20% , m/V ）
        X-gal 溶液（ 2% , m/V ）
    培养基：
        含有适当抗菌素的 LB 或 YT 琼脂板
        LB 或 YT 顶层琼脂
专用设备：
    可调至 45 ℃ 的恒温块木制牙签或接种环
载体和菌体:
    重组质粒转化的 E.coli
方法：
1、 将融化的顶层琼脂分装于 17*100mm 试管,将试管置于 45 ℃ 的加热块糟内备用.
2、 将加热块取出第一只试管,快速加入活菌含量不多于 3000 （ 90mm 培养板）或 10000 （ 150mm 培养板）的细菌悬液 0.1ml .盖紧试管盖颠倒数次,以使细菌在琼脂中混匀.
3、 打开试管盖,按下表所示加入适量 X-gal 和 IPTG （如果需要）.盖紧管盖缓慢颠倒数次混匀内容物
                                                                                                                                                       顶层琼脂成分

4、 快速将融化订餐琼脂倾入含有适当抗生素的凝固琼脂板的中部,选择培养板使琼脂三匀.
5、 重复步骤 2-3 ,完成所有样品的铺板.
6、 于室温使琼脂凝固,擦净培养板盖上的冷凝水,颠倒培养板于 37 ℃ 培养 12-16h .
7、 取出培养板于 4 ℃ 放置数小时使菌落显色. 8、 鉴定携带重组质粒的克隆
携带野生型质粒的克隆含有 β- 半乳糖苷酶活性,菌落的中央呈淡蓝色,外周呈深蓝色.
携带重组质粒的克隆无 β- 半乳糖苷酶活性,菌落呈奶白色或蛋壳蓝,又是会在菌落中央出现假性蓝斑.
9、 筛选和培养携带重组质粒的克隆.

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