1)直接法
1．标本固定.
2．PBS洗涤2×3分钟.
3．1％H2O2(或1％ H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10～20分钟.
4．正常血清(1:10)孵育,室温20分钟.
5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜.
6．PBS洗涤3×3分钟.
7．DAB＋H2O2显色5～10分钟,镜下控制染色结果.DAB＋H2O2应用前15分钟配制.
8．充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检.

2)间接法
1．标本固定.
2．PBS洗涤2×3分钟.
3．1％H2O2(或1％H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10～20分钟.
4．正常血清(1:10)孵育,室温20分钟.
5．滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜.</P< p>
6．PBS洗涤3×3分钟.
7．滴加酶标二抗,室温1小时.
8．PBS洗涤3×3分钟.
9．0.04％DAB＋0.03 ％H2O2显色5～10分钟.
10．充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检.

3)PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)
1．标定固定后,PBS洗涤.
2．1％H2O2(或1％H2O2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10～20分钟.
3．PBS洗涤2×3分钟.
4．正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟.
5．滴加一抗,室温1小时或4℃过夜.
6．PBS洗涤3×3分钟.
7．滴加二抗,室温30分钟.
8．PBS洗涤3×3分钟.
9．加PAP复合物,室温60分钟.
10．PBS洗涤3×3分钟.
11．0.04％DAB＋0.03％ H2O2显色5～10分钟.</P< p>
12．充分水洗.
13．苏木精复染,封片观察.

4)双PAP法
1～10同单PAP法.
11．二次加酶标二抗.
12．PBS洗.
13．二次加PAP.
14．PBS洗.
15．0.04％DAB＋0.03 ％H2O2显色5～10分钟.
16．苏木精复染核,封片,镜检.

5)ABC法(卵白素－生物素－过氧化物酶复合物法)
1～8同PAP法
9)加ABC液,室温60分钟.
10)PBS洗.
11)0.04％DAB＋0.03％ H2O2显色5～10分钟.
12)充分水洗.
13)苏木精复染核,封片,镜检.

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