1．制胶：（1％）
    琼脂糖                2.5g
    10×Mops缓冲液   25.0ml
    H2O               192.0ml
2．在微波炉中加热煮沸使胶完全溶于水并灭菌.
3．取出胶冷却到60℃,于通风柜中加45ml甲醛,混匀.
4．加20μl溴化乙锭,混匀.
5．令胶液再冷却10分钟.
6．将其倒入四面封好的电泳槽中,加样品梳,约20分钟形成电泳凝胶.
7．加入1×Mops缓冲液于电泳槽,盖满胶表面,但不>1cm.
8．取10～15μg RNA样品,真空离心干燥,再溶于20μl载样缓冲液,加热95℃ 2分钟,使RNA变性.
9．每孔中20μl RNA点样,同时加一标准物.
10．一般35V电泳,从下午4pm～9：30am.
11．取出胶在紫外灯下观察,将刻度尺放在胶旁照像.成功的电泳在胶上28S（约5kb）18s（约2kb）处可见明显的溴化乙锭带.
12．用500ml 10×SSC浸泡洗涤胶2次,每次20分钟,去除甲醛.</P< p>
13．其它吸印步骤完全与Southern Blot相同,只是吸印缓冲液为10×SSC.
14．室温下至少吸印12小时.
15．吸印完成后,取出胶与滤膜,表明加样起始部位、膜的方向及标号、用Whatman滤纸包好,80℃真空干燥2小时；如为尼龙膜在紫外灯下照射5分钟.
16．分子杂交：杂交原理与Southern 相同,但所用杂交液及杂交、洗涤温度与之不同.预杂交液制备：
    50％ 甲酰胺
    1％ SDS
    1M NaCl
    10％ 硫酸葡聚糖
17．将滤膜放入塑料袋,加入10ml预杂交液,去除气泡后封袋,在42℃水浴中振荡至少6小时.
18．制备变性鱼精DNA≥100μg/ml,变性同位素标记的探针（加入袋中的终浓度≤10ng/ml或1～4×105dpm/ml）.
19．将此液0.5～1ml以针头注入含预杂交液的塑料袋中,排除气泡,从针眼处重新封死塑料袋,再用玻棒在袋上赶几次,使探针与预杂交液充分混匀,42℃振荡水浴6～42小时.
20．膜的洗涤：
    a.2×SSC 100ml室温中振荡5分钟,共2次.
    b.1％SDS的2×SSC 200ml 60℃振荡30分钟,共2次.</P< p>
    c.0.1×SSC 100ml室温振荡30分钟,共2次.
21．膜在室温中自然干燥后,用塑料纸包好即可进行放射自显影过程（同DNA检测）.

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