实验原理
    组织DNA的提取和纯化的实验方法用含EDTA的溶液洗涤细胞,SDS(十二烷基硫酸钠)破碎、裂解细胞,消化蛋白质,使核蛋白解聚并使细胞内的DNA酶失活,用酚、氯仿变性蛋白质并去除杂质,最后用乙醇沉淀得到纯化的DNA.

实验所需试剂
1. 裂解缓冲液
2. 苯酚-氯仿溶液
3. 氯仿-异戊醇溶液
4. 冰无水乙醇及70%乙醇
5. TE缓冲液
6. 5mol/L NaCl

操作步骤
1.处死小白鼠一只,取新鲜肝脏,用生理盐水清洗去血水.
2.每克组织加10ml裂解液制成匀浆.
3.取2ml匀浆于离心管中,加等体积苯酚-氯仿溶液,加盖,缓缓来回颠倒5min,离心2500rpm×10min.
4.取上层水相,加等体积氯仿-异戊醇溶液,加盖,缓缓来回颠倒5min,离心2500rpm×10min.
5.取上层水相至玻璃管内,加5mol/L NaCl至终浓度为0.3mol/L(2ml 100μl,3ml 150μl).
6.加2.5倍体积的冰无水乙醇,加盖,缓慢摇匀,见白色絮状沉淀DNA出现.
7.用玻棒捞起DNA沉淀置于试管中,用1mlTE溶解.
8.定量
    吸取DNA溶液100μl 2.9mlTE(30倍稀释),在260nm和280nm下读取吸光度值,
9.计算
    DNA浓度(ug/ml)=A260 nm×50×1/光径×稀释倍数

相关阅读:
质粒DNA的大量制备
质粒DNA的小量制备
质粒DNA的碱裂解法提取与纯化
质粒DNA的提取与纯化
植物总基因组DNA提取纯化方法综述