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TriZol提取RNA的基本步骤:

发布时间 2009-07-25 浏览量 作者: 无 来源: 生物无忧

1)a贴壁细胞弃去培养基后加入适量 Trizol,用枪头把细胞从板上吹下,然后转移到1.5ml EP管中.
    b组织用液氮研磨成粉末后挑少许粉末于已加入1ml Trizol的EP管中,剧烈震荡使粉末分散,使细胞裂解完全.
2)加入氯仿0.2ml/ml Trizol ,用力振摇15 sec.15-30℃下孵育2-3min,离心(4℃,12,000g,15min).
3)离心后液体分为三层 ,小心吸取上层无色液体移入一新的EP管中.
4)加入等体积异丙醇, 混匀,-20℃下孵育30min,离心(4℃,12,000g,10min).
5)去上清,沉淀加入75%乙醇1ml,轻微振荡15sec,离心(4℃,7,500g,5min).
6)小心去上清,管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3-5min.最好是用枪头吸取上清,尽量除去.
7)加入30μl DEPC水溶解,-80℃冰箱保存.

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