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RNA提取常见问题

发布时间 2009-07-25 浏览量 作者: 无 来源: 生物无忧

一、RNA的降解
(1)新鲜细胞或组织的RNA降解
    1、裂解液的质量不好
    2、外源RNase的污染
    3、样品量过多,裂解液的用量不足
    4、组织裂解不充分
    5、另外某些富含内源酶的样品 (如脾脏,胸腺等),很难避免 RNA 的降解.建议在液氮条件下将组织碾碎,取适量样品,并且匀浆时使用更多裂解液.
(2)冷冻样品的RNA降解
    1、样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后可以移至-80℃冰箱或在液氮中保存.
    2、先用液氮研磨,再加裂解液匀浆;
    3、样品与裂解液充分接触前避免融化,研磨用具必须预冷,碾磨过程中及时补充液氮.

二、OD260 /OD280 比值偏低
    (1)蛋白质污染;(2)苯酚残留;(3)抽提试剂残留;(4)仪器不准确.

三、下游实验效果不佳
    (1)RNA 降解;
    (2)抽提试剂的残留;
    (3) 样品中杂质的残留;
    (4)DNA 污染 .
    用75%酒精洗涤多一两次,以去除样品中的杂质,洗涤后后要晾干,防止抽提试剂的残留;如有DNA污染,对下游实验有影响的话可以用DNA酶进行消化.

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