目的要求：
1、了解果蝇的生活史,学会饲养果蝇.
2、掌握区别雌雄果蝇的方法.
3、掌握遗传学实验常用果蝇品系的特征及常见突变类型.

实验原理：
    黑腹果蝇 (Drosophila melanogaster 染色体数目2n=8) 是遗传学实验的重要材料来源之一.果蝇具有饲养方便,来源广泛,生活史短,性状便于观察等许多特点.因此,在遗传学研究中,果蝇可广泛地用来完成遗传三大定律及连锁互换的验证性试验,以及唾腺染色体观察等.

试剂和器材：
1、实验材料：
    野生型雌,雄性黑腹果蝇 (Drosophila melanogaster) 及其常见的各种突变体.
2、试剂：
    乙醚,琼脂,绵白糖,丙酸,酵母粉,玉米粉,乙醇.
3、器材：
    显微镜,放大镜,恒温培养箱,高压灭菌锅,培养瓶,麻醉瓶,白磁砖,毛笔,石棉网,棉花,纱布,口取纸,滤纸片,牛皮纸,小镊子.

操作方法：
l、果蝇饲养：
(1)果蝇生活史：
    果蝇是昆虫纲,双翅目,果蝇属中的一个种.果蝇生活史具完全变态过程,即完成一个生活史周期要经过卵,幼虫,蛹,成虫四个阶段.果蝇生活史短,完成一个生活史周期在最适生活温度条件下仅需两周时间.饲养果蝇方便容易,如果没有特殊要求.可在20～30天左右继代一次.果蝇的繁殖率高,一对果蝇交配以后可产卵几百个,这对遗传学来说是非常重要的.另外,果蝇的突变类型多,性状容易辨认.因此,果蝇作为遗传学实验材料是十分适宜的.
(2)果蝇培养基：
    果蝇因经常在果园和水果上见到而得名.果蝇以酵母菌为食,腐烂的水果上经常有酵母菌.凡是能作为酵母菌发酵的基质都可以作为果蝇培养基.目前,常用的果蝇培养基有香蕉培养基(多在南方使用)和米粉培养基(多在北方使用).下面以l00 mL为单位介绍米粉培养基的成分配比(表4).

表4 果蝇培养基的成分(100mL)

配制时先将水分成两份,其中一份用于溶解琼脂和糖,另一份煮玉米粉,待两份分别溶解煮好后再混合到一起煮沸.关掉火后再加入丙酸,这时培养基很粘稠,要充分搅拌之后再分装培养瓶内.待培养基冷却之后,在培养基表面撒上一层酵母粉,插上一块经灭菌后的滤纸片作为幼虫化蛹的干燥场所.
(3)培养瓶和灭菌：
    经常用来饲养果蝇用的容器是广口瓶和指管.根据实验的特点和所需果蝇的数量来决定采用哪种容器.实验室最常用的是125 mL和60 mL两种培养瓶.不管是哪种培养瓶,在使用之前必须经过灭菌,包括瓶塞在内.灭菌一般采用高压灭菌方法,灭菌温度121～125℃,时间18~20 min.灭菌也可采用煮沸方法和干热灭菌的方法.


2、果蝇的繁殖过程：
    果蝇生活的最适温度是20～25℃.在最适温度下完成一个生活史周期需12～15天.果蝇的生活史周期与温度关系密切,提高温度和降低温度会使果蝇的生活史周期缩短和延长.将温度提高到26℃以上,完成一个生活史周期只需10天左右.如果超过30℃,会造成雌蝇的育性下降或不育,甚至可引起果蝇死亡.相反,把温度降低到10℃,果蝇的生活史周期可延长到50多天,这时果蝇的生活力很低.
    雌果蝇一般在羽化后12h开始交配繁殖,交配后两天开始产卵.卵孵化成幼虫后要经过两次脱皮才能从一龄幼虫变为三龄幼虫.幼虫生活6～7天准备化蛹,化蛹之前从培养基中爬出来附着在瓶壁或插在培养基上的滤纸片上逐渐形成一个梭形的蛹.幼虫在蛹壳内完成成虫体型和器官的分化,最后从蛹壳的前端爬出.
3、果蝇的雌雄识别：
    雌,雄果蝇在外形上有很大区别,稍加注意便可找出雌,雄果蝇的特点.例如,果蝇个体的大小,腹部条纹的数量,腹部末端圆与尖,性梳的有与无等(表5).
                           
                           表5 果蝇的雌雄区别

在鉴别雌,雄果蝇的特征中,除性梳这一性状需要借助显微镜观察外,其它性状都用肉眼直接观察.   
        果蝇的性梳是一个决定雌,雄果蝇的第二性征.性梳着生在雄性果蝇第一对前足的第一个跗节上.因其形状与梳头的梳子非常相似,又与性别有关,故得此名.
4、处女蝇的选取方法：
    雌性果蝇生殖器官有受精囊,可保存交配所得的大量精子,能使大量的卵受精.因此,在进行果蝇杂交实验的时候,雌性果蝇必须是处女蝇,以保证实验结果的可靠性.雌果蝇自羽化开始10h之内尚未达到性成熟,因而没有交配能力.选择处女蝇时,先把培养瓶中原有的果蝇全部除去,收集10h之内由蛹羽化出来的新果蝇,从中选出的雌蝇应该全部都是未交配过的处女蝇.如果要验证选取的处女蝇是否准确,先单独放入一个培养瓶内,不要放入雄蝇,3天后看雌蝇是否产卵.如果有新卵产出,那么它就不是处女蝇了.处女蝇选定后即可进行杂交试验.
5、果蝇的麻醉：
    无论是杂交实验还是进行性状观察,都需要先麻醉果蝇.麻醉果蝇时切忌不要在原来的培养瓶中直接麻醉,否则被麻醉的不仅是成蝇,蛹和幼虫也被连带麻醉了.麻醉前,要先把果蝇导入另外一个麻醉瓶中进行麻醉.
    把果蝇导入麻醉瓶时要注意,先轻轻敲打果蝇培养瓶,让果蝇落到瓶的底部,然后迅速打开瓶塞,把麻醉瓶扣在培养瓶上,让其瓶口对接,果蝇会自然向上运动.另外,也可以用黑纸包住培养瓶,果蝇向上运动更快.如果确有部分果蝇始终不进入麻醉瓶,也可以把培养瓶倒过来,不断敲打培养瓶壁,使果蝇被动进入麻醉瓶,然后快速分离麻醉瓶,塞上瓶棉塞.
 

   麻醉时,仍然先敲打麻醉瓶,让果蝇落到瓶的底部,迅速往麻醉瓶棉塞上滴上少量乙醚再盖到瓶口上.麻醉开始后,果蝇很快就会进入麻醉状态.因此,要密切注意观察麻醉情况,要根据实验的要求来掌握果蝇的麻醉程度,试验人员切忌离开.用于杂交实验的亲本果蝇切不能麻醉过度,否则会影响果蝇的生活力.在观察时发现麻醉现象出现,就可以去掉麻醉剂.如果被麻醉果蝇只是用来识别雌雄和观察性状,这些果蝇要深度麻醉直至死亡.否则,在实验没做完之前果蝇便苏醒过来,影响观察,有的还会飞跑.
    区别麻醉状态和麻醉致死果蝇的方法是以翅膀是否外展为依据.处于麻醉状态的果蝇两个翅膀仍然重叠紧贴在背腹上;而麻醉致死的果蝇翅膀则离开腹部呈外展状态,不管外展程度如何,都按死亡果蝇对待,切不可以选择这种状态的果蝇做杂交用的亲本.
6、果蝇突变性状的观察：
    果蝇的突变类型很多,实验室常用的有很多种变异品系,如白眼,棒眼等(见表6).这些果蝇性状大多数都是可用肉眼观察到的,只有刚毛的形状需要在显微镜下观察.
                                                      
                        表6 果蝇常见突变性拽特征

突变性状名称	基因型号	性状特征	所在染色体
白眼	w	复眼白色	X
棒眼	B	复眼横条形	X
黑檀体	e	体呈乌木色,黑亮	ⅢR
黑体	b	体呈深色	IIL
黄身	y	体呈浅橙黄色	X
残翅	vg	翅退化,部分残留不能飞	IIR
焦刚毛	sn	刚毛卷曲如烧焦状	X
小翅	m	上一篇： 花和果实的解剖构造观察 下一篇： 酵母DNA分离 名医传世SaaS培训管理平台 地址：广东省广州市天河区天源路804号1968萌芽创意园A07栋 联系方式：4007 888 555 名医传世 版权所有Copyright 2019 by 广东医群科技有限公司 备案号：粤ICP备15085789号