DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切.变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中,通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白,纯化细胞DNA,再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳,结合DNA解旋荧光测定（FADU）法和检测DNA双链断裂.

1、主要试剂及配制方法：
（1）蛋白酶K,SDS,低熔点琼脂糖.
（2）配制方法：

l     细胞缓冲液（A液）.0.25mol/L NaCl + 10mmol Na2HPO4 + 1mmol/L MgCl2,pH7.2.

l     细胞裂解液（B液）.9mol/L脲 + 10mmol/L NaOH + 2.5mmol/L环烷二胺四乙酸 + 0.1%SDS.

l     碱性变性液I（C液）.B液 + 0.2mol/NaOH,体积比为45：55.

l     碱性变性液I（D液）.B液 + 0.2mol/NaOH,体积比为40：60.

l     抗变性液（F液）.1ug/L溴化乙锭 + 13.3mmol/NaOH.

2、实验操作步骤：
（1）DNA双链断裂的FADU测定：

l     分别取对照组和处理过的细胞2 x 10^5个加入试管内,对照管设T管（未变形）、B管(空白)、P管（部分变性）3组,处理过的细胞仅设Pi组,每组3个平行样品,,各加0.2ml细胞裂解液,0℃裂解细胞10min.

l     细胞裂解后,T管加E液（抗变性液）0.4ml,其他各管沿管壁缓慢加入0.1mlC液和0.1mlD液,不混匀,置0℃避光30min.

l     B管超声处理20s置15℃ 45min.

l     降为0℃后,P管、B管加E液0.4ml,混匀后T管、P管超声处理5s.

l     各加入F液1ml,混匀后,室温下用荧光分光光度计测量相对荧光强度（激发光520nm,发射光590nm）.

l     结果计算.

（2）DNA双链断裂的GVGE测定：

l     细胞DAN准备.收集细胞,用PBS洗涤并悬浮,调整细胞浓度为1 x 10^7个/ml,与等体积1.2%低熔点琼脂糖混合后制成小块,细胞胶块悬于含有不同浓度处理因素的培养基中,37℃孵育15-30min后将细胞胶块置于2mg/ml蛋白酶K、1%SDS、0.5mol/LEDTA、10mmol/L Tris-HCl的裂解液中,50℃,24h,融解细胞,去蛋白.然后用TE缓冲液清洗胶块,置于0.5mol/L EDTA中4℃保存待电泳.

l     电泳.电泳凝胶为0.9%琼脂糖,胶块大小10cm x 11.5cm x 1cm.取上述制备的DNA样品胶块放入电泳凝胶的加样孔中,用0.9%琼脂糖封固以防气泡,置于含45mmol/ Tris-硼酸、1.25mmol/L EDTA,pH8.0的电泳缓冲液中,逐渐升高电压,0.6V/cm x 40h,1.5V/cm X 7h,3.0V/cm x 2.5h,电泳完毕,取出凝胶.

l     照相图像分析.将上述凝胶在紫外灯下照射,同时,凝胶块用图像仪进行分析,显示样品DNA