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RACE(rapid-amplificationofcDNAends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术,通过 PCR 技术实现的,无须建立cDNA文库,可以在很短的时间内获得有利用价值的信息.RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段,通过往两端延伸扩增从而获得完整的3\'端和5\'端的方法.
RACE的扩增原理图
![](\https://img.news.mycs.cn/d/file/shiyanjishufangfa/RNAshiyan/RACE/2012-02-16/016316f803446548bc307af3718ef81d.jpg\")
RACE技术-主要分类：
一般分5-和3-RACE两种.
3-RACE较简单,首先将mRNA或总RNA用PolyT引物反转录,根据一般基因具有polyA尾巴的特点,选用特异引物(根据已知序列设计)和PolyT引物PCR即可.大多实验者反映一次PCR可以搞定.
5-RACE相对较难,目前流行几种5-RACE.其一为加接头(传统),根据接头引物和自己设计特异引物PCR,可以设计巢式PCR二次扩增.另外,有利用反向PCR技术,连接成环在PCR.还有,GENE公司一种smartRACEPCR,利用反转酶末断加C特点,直接加上多G接头,转换模板而无需用连接酶加接头.
RACE技术-发展历史：
![](\https://img.news.mycs.cn/d/file/shiyanjishufangfa/RNAshiyan/RACE/2012-02-16/a7ff2f3b6161fdc0bd7f2e978f8fa6c6.jpg\")
RACE技术
经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术,主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端,包括单边PCR和锚定PCR.该技术提出以来经过不断发展和完善,克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等,1995：Schaefer,l995：Chen,1998：Bespalova等,1998：Matz等1999).对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RT-PCR技术的改进：改进之一是利用锁定引物((lockdockingprimer)合成第一链cDNA,即在oligo(dT)引物的3′端引入 两个简并的核苷酸【5′-Oligo(dT)16_30MN-3′,M=A/G/C;N=A/G/C/T】,使引物定位在poly(A)尾的起始点,从而 消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位的结合所带来的影响；改进之二是在5‘端加尾时,采用poly(C),而不是poly(A)；改进之三是采用RNaseH一莫洛尼氏鼠白血病毒(MMLV)反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温h(60度-70度)有效地逆转录mRNA,从而消除了5‘端由于高CC含量导致的mRNA二级结构对逆转录的影响；改进 之四是采用热启动PCR(hotstartPCR)技术和降落PCR(touchdownPCR)提高PCR反应的特异性.
随着RACE技术日益完善,目前己有商业化RACE技术产品推出,如CLONTECH的MarathoTM技术和SMARTTMRACE技术术.邢桂春等(2001)先后使用上述两种试剂盒进行RACE反应,结果发现使用MarathonTM所得到的片断总是比采用SMARTsup]TMRACE试剂盒到所得到的片断短.其原因在于 MarathonTM技术反转录反应往往不能真正达到mRNA的5’末端.所以认为,进行RACE反应应当优选SMARTTMRACE试剂盒.
相关阅读：
cDNA 3’末端的快速扩增（3’-RACE）
RACE技术的原理和操作
RNA的吸印转移法（Northern blot）
DNA甲基化PCR引物的设计
![](\https://img.news.mycs.cn/d/file/shiyanjishufangfa/weishengwuxuejishu/bingdu/2010-02-07/c7c8bb84aa8dbc4f79a86b30144472af.jpg\")
经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术,主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端,包括单边PCR和锚定PCR.该技术提出以来经过不断发展和完善,克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等,1995：Schaefer,l995：Chen,1998：Bespalova等,1998：Matz等1999).对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RT-PCR技术的改进：改进之一是利用锁定引物((lockdockingprimer)合成第一链cDNA,即在oligo(dT)引物的3′端引入 两个简并的核苷酸【5′-Oligo(dT)16_30MN-3′,M=A/G/C;N=A/G/C/T】,使引物定位在poly(A)尾的起始点,从而 消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位的结合所带来的影响；改进之二是在5‘端加尾时,采用poly(C),而不是poly(A)；改进之三是采用RNaseH一莫洛尼氏鼠白血病毒(MMLV)反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温h(60度-70度)有效地逆转录mRNA,从而消除了5‘端由于高CC含量导致的mRNA二级结构对逆转录的影响；改进 之四是采用热启动PCR(hotstartPCR)技术和降落PCR(touchdownPCR)提高PCR反应的特异性.
随着RACE技术日益完善,目前己有商业化RACE技术产品推出,如CLONTECH的MarathoTM技术和SMARTTMRACE技术术.邢桂春等(2001)先后使用上述两种试剂盒进行RACE反应,结果发现使用MarathonTM所得到的片断总是比采用SMARTsup]TMRACE试剂盒到所得到的片断短.其原因在于 MarathonTM技术反转录反应往往不能真正达到mRNA的5’末端.所以认为,进行RACE反应应当优选SMARTTMRACE试剂盒.
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