一、硅胶基质填料：
1、正相色谱：
    正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团,如（NH2,APS）和氰基团（CN,CPS）的键合相填料.
    由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱.正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷 （Methylene Chloride）等.
2、反向色谱：
    反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相.反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物.样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留.
    常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等.
二、聚合物填料：
    聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重要优点是在PH值为1—14均可使用.相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水 性；大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效.现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低.
三、其它无机填料：
    其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途.如,石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料.这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性.该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强.石墨化碳可用于分 离某些几何异构体,由于在HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用.氧化铝也可以用于HPLC.氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱 柱柱床,其优点是可以在PH高达12的流动相中使用.但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强,应用范围受到一定限制,所以未能广泛应用.新型色谱氧化锆基 质填料也可用于HPLC.商品化的只有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH1-14,温度可达100℃.由于氧化锆填料是最近几年才开始研究,加 之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行之中.
    怎样选择填料粒度：目前,商品化的色谱填料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3和5um填料进行.填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背 压.粒度越小,柱压越大,柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用.在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度,但不是唯一的因素.如果固定相选择是正 确,但是分离度不够,那么选用更小的粒度的填料是很有用的.3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而,3um的色谱柱的 背压却是5um的2倍.与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱,即相同的塔板数或分离能力,但是柱长更短,以缩短分析时间.另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力.

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