IOS下载  IOS下载
IOS下载二维码
手机扫描二维码
Android下载  Android下载
手机扫描二维码

具体小量单链DNA模板制备

发布时间 2010-01-19 浏览量 作者: 无 来源: 生物无忧

方法:
1、在17×100mm的试管中加入5ml2×YT培养基,接种选定的大肠杆菌F’-菌株单菌落.37℃培养过夜,振荡速度为300r/min.
2、将0.1ml培养液转移到装有含5mmol/LMgSO4的5ml2×YT培养基的30ml一次性离心管中,剧烈振荡,培养2h.
3、将5ml培养液加到45ml含5mmol/LMgSO4的2×YT培养基中,分别取1.5ml培养液分装到尽可能多的13×100mm的试管中用于噬菌体的培养.
4、用无菌牙签或接种针在每只试管中接种一个单独的噬菌斑,试管于37℃剧烈振荡培养8-12h.
5、在各只试管中分别取约1.2ml培养液,加入不同的微量离心管中,室温以最大转速离心5min.剩余的培养液作为种子保存.
6、准确转移1ml上清液到含有20%PEG 8000和2.5ml/LNaCl的200ul溶液的干净离心管中,翻转离心管几次,进行混合.注意不要使用涡旋振荡器.离心管室温孵育15-30min.
7、以最大转速离心10min,回收沉淀的噬菌体颗粒.要仔细吸除各管中残留的最后一滴上清液.
8、通过涡旋振荡将白色噬菌体颗粒沉淀重悬于100ulTE(ph8.0)中.待完全溶解后,进行下一步实验.
9、加入100ulTE(ph8.0)平衡酚,涡旋振荡混合两次,每次30s.用微量离心机室温离心3min,分离两相.
10、将水相转移到干净离心管中,加2倍体积乙醇,0.3mol/L乙酸钠(ph5.2)沉淀回收单链DNA(室温放置15-30min).于4℃最大速度离心5min,回收DNA沉淀.
11、用70%乙醇小心沉淀洗涤DNA沉淀,离心,小心去除上清,室温干燥DNA沉淀.
12、加40ulTE(PH8.0)溶解DNA.

相关阅读:
用人体DNA制作的软糖你敢吃吗?
噬菌体让生物分子进化增速100倍
《新英格兰医学杂志》刊出致命大肠杆菌研究成果
转基因大肠杆菌可协助清除环境汞污染


回到顶部