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适用于PCR的优化基因组的分离

发布时间 2010-01-17 浏览量 作者: 无 来源: 生物无忧

方案 A :
材料:
PCR 裂解液 A
67mmol/L Tris-Cl(ph8.8)
1.6mmol/L 硫酸铵
5 mmol/L β- 巯基乙醇
6..7 mmol/L MgCl2
6.7umol/L EDTA(ph8.0)
1.7umol/ L SDS
50ug/ml 蛋白酶 K
方法:
1、取出 96 孔培养板上的培养基。
2、每孔加入 100ul PCR 裂解液 A, 37 ℃ 放置 1h,然后 80 ℃ 放置 10min 以灭活蛋白酶 K.
3、使用 2-25ulDNA 作为 PCR 的模板。

方案 B :
材料:
PCR 裂解液 B
10mmol/L Tris-Cl (ph8.3)
50mmol/L KCl
2 mmol/L MgCl2
0.45% (V/V) NP-40
0.45% (V/V) Tween-20
20ug/ml 蛋白酶 K
裂解缓冲液:
670mmol/L Tris-Cl (ph8.8)
166mmol/L 硫酸铵
1mg/ml 小牛血清白蛋白
方法:
1、取出 96 孔培养板上的培养基。
2、每孔加入 50ul PCR 裂解液 B, 37 ℃ 放置过夜,然后 95 ℃ 放置 30min 以灭活蛋白酶 K.
3、每孔中加入等体积的裂解缓冲液。
4、使用 10-50ul DNA 作为 PCR 的模板

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