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植物多倍体诱发实验

发布时间 2010-01-17 浏览量 作者: 无 来源: 生物无忧

目的要求:
1、了解染色体整倍性变化的特点.
2、掌握诱导多倍体的方法技术及其在植物育种上的意义.

实验原理:
    多倍体是指细胞核内具有二个以上染色体组,如3n,4n,6n等的植物.多倍体广泛地存在于自然界中,小麦是异源六倍体,棉花是4倍体等.多倍体产生的途径除自然发生外,还可以人工诱导.诱导多倍体可以采用物理方法如射线处理,低温,高温,嫁接等手段.还可以采用化学的方法,如秋水仙素,富民农,异生长素等药品都能诱发多倍体.其中以秋水仙素效果最好.
    秋水仙素是百合科植物秋种番红花—秋水仙 (ColcMcum autumnale) 的种子及器官中提炼出来的一种生物碱,具有麻醉作用.化学分子式为.秋水仙素对植物的种子,幼芽,花粉,嫩枝等都能产生诱变作用.秋水仙素主要作用于细胞分裂过程中纺锤体的形成,使细胞分裂后期染色体不能分向两极而被阻截在中期,经过间期染色体复制,使染色体数目加倍.

试剂和器材:

1、材料:
    大蒜 (Allium sativum 染色体数目2n=16)
2、试剂:
    秋水仙素,乙醇,冰乙酸,l mol/L,HCl,石炭酸品红.
3、器材:
    恒温水浴锅,显微镜,天平,培养皿,镊子,刀片,吸水纸,载玻片,盖玻片.

操作方法:

1、生根:
    大蒜去老根,经水培或沙培生根长至l.5~2 cm左右取出,洗净根部的泥土或沙子.
2、秋水仙素处理:
    把蒜根转入0.1%的秋水仙素溶液中培养36~48h,由于培养时间较长,需添加秋水仙素溶液,以防干枯.待根尖膨大时可取材固定.
3、固定:
    将经过秋水仙素诱导分生组织已经膨大的根尖在上午10~11点或下午4~5点时剪下来.清水冲洗几次以后,放在Carnoy固定液中固定4~24h.固定好的材料可以放在70%的酒精中保存,备用.
4、解离:
    1 mol/L HCl放在60℃的恒温水浴锅中预热,再把根尖放入1 mol/L HCl中开始计时,解离时间为4 min.根尖解离之后,要用清水反复冲洗干净.
5、根尖压片:
    取根尖分生组织一部分放在一洁净的载片上,先用解剖针把材料碾碎并铺展开.然后,滴上一滴石炭酸品红染色5 min以后,盖上盖片,先把材料轻敲几下,然后再用力压实.
6、实验结果观察:
    借助显微镜寻找染色体分散良好,染色体形态清楚的4n=32细胞.在观察时有的细胞中确是32条染色体,但每条染色体只是一条染色单体,这不能算是4n的细胞,只能说是2n的后期相,这样的细胞必须要经过间期染色体复制才能成为真正的4n细胞.

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