材料:
  缓冲液和溶液:
    SM;氯仿
  培养基:
    LB或NZCYM琼脂平板
    LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖(0.7%)
  离心机和转子:
    Sorvall  SS-34或相当型号
  专用设备:
    加热设备或预置于47℃的水浴
    螺口或卡口聚丙烯试管(13mm*100mm或更大)
  附加试剂:
    本方案步骤9所需的试剂列于本章方案1中.
  载体和菌株:
    λ噬菌体原种
    大肠杆菌平板细菌

方法:
1、铺平板感染培养物的制备:
    对直径为10cm的培养皿,取105pfu的噬菌体(通常约为一个噬菌斑重悬液的1/10或一个大噬菌斑重悬液的1/100)与0.1ml铺平板细菌混匀.
    对直径为15cm的培养皿,去2*105pfu的噬菌体与0.2ml铺平板细菌混匀.
    至少要置一个含为感染细胞的对照管,将感染培养物和对照均置于37℃培养20min,将病毒吸附到细胞上.
2、加3ml已熔化的47℃的琼脂糖(10cm平板)或7ml(15cm平板)至感染细胞的第一个试管中,通过轻拍或涡旋振荡数秒混匀,立即倒入已表明的琼脂平板中央.尽量避免气泡的产生.选择平板确保细菌和顶层琼脂糖分布均匀.重复这一步,知道每管中的东西均转移至各个平板中.
3、将平板于37℃正置约12-16h.
4、从培养箱中取出平板,加入SM(10ml平板加5ml,15ml平板加10ml),在4℃摇床上晃动数小时.
5、用不同的巴斯德吸管分别将各个平板中的SM尽可能地转移至螺口或卡口的无菌聚丙烯试管中.
6、在每个平板中再加1ml新鲜的SM,轻轻晃动液体,随后将平板倾斜放置15min,将所有的液体集中于一个地方,再吸取SM冰浴第一次收集的混合,舍弃平板.
7、加0.1ml氯仿至含SM的各试管中,轻轻地涡旋振荡,然后通过于4℃4000g(Sorvall  SS-34为5800r/min)离心10min去掉细胞碎片.
8、将上清转移至新的聚丙烯试管中,在每管中加一滴氯仿.将获得的噬菌体平板培养原种于4℃保存
9、用噬菌斑分析的方法测定每个原种中感染性病毒颗粒的浓度.

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