超薄切片制作样品过程大体分为取材、固定、漂洗、脱水、渗透包埋与聚合、切片、染色等.细胞超薄切片技术中如何把细胞完整无损的从培养瓶壁上包埋下来是最大的难题.新的定型产品无菌聚苯乙烯塑料薄膜的是使用解决了这个难题,把薄膜放在培养皿中,让细胞直接长在塑料薄膜上,不仅细胞生长效果好,而且可与细胞一起包埋切片,省去了许多麻烦.
1 、取材
（ 1 ）离心法 ： 适用于悬浮生长细胞或单层生长细胞,欲观察细胞内部超微结构,取对数生长期的细胞低速离心,令细胞沉于锥形离心管底部,吸除上清,立即加戊二醛固定.
（ 2 ）原位法 ： 将无菌的聚苯乙烯薄膜剪成适宜的小块置入培养皮中,然后接种细胞悬液,待细胞附于薄膜上并生长后,取出进行固定.
2 、固定
    将离心管中的细胞团块取出的薄膜移入青霉素小瓶中,在 4 ℃ 用 PBS 漂洗 3 次,每次 10min .再用 1% 四氧化锇在 4 ℃ 固定 15-30min ,接着用 PBS 漂洗 3 次.
3 、脱水
    用系列丙酮在室温下脱水.
    50% 丙酮溶液 1 次, 10min .
    70% 丙酮溶液 1 次, 10min .
    900% 丙酮溶液 2 次,每次 10min .
    100% 丙酮溶液 3 次,每次 10min .
4 、浸透
    吸弃瓶中脱水剂,加 3ml 纯丙酮 /EPON812 包埋剂,室温下放置 30min 后,弃去稀释的包埋剂,加纯包埋剂 1ml ,问放置 2h 或过夜.
5 、包埋
（ 1 ）细胞团块 ： 吸取混合包埋剂滴 2 滴 2 号胶囊模块孔的底部,把细胞团块移入胶囊底部中心,注满混合包埋剂,放 60 ℃ 烤箱烘烤 2h ,使之固化成硬块.
（ 2 ）细胞薄膜 ： 将预先干燥的 EPON 明胶囊注满混合包埋剂,倒盖在单层细胞上,在 60 ℃ 固化 24h .
6 、修块
    将包埋块安装在特制的夹具上,在显微镜下用单刃刀片修整去除表面的包埋剂,并做记号以便定位.
7 、切片
(1) 先将包埋块固定在超薄切片机上,切厚约 1um 的半薄切片,用 HE 染色法染色.
(2) 镜下观察细胞图像,确定进行超薄切片的部位,并做标记.
(3)准备直径 3mm , 150-200 目的铜网有支持膜的,用清洗液清洗,并用无水乙醇脱水干燥.制备好支持膜,小心放在铜网上,
(4)在超薄切片即上安装三角形玻璃刀,固定包埋块,切取 50-70nm 厚度的超薄切片,用睫毛笔挑选切片并用钢丝环套取切片,贴在铜网有支持膜的一侧,保存在干燥器皿中待染色.
8 、电子染色
(1)用一干净培养皿,内放干净的牙科石蜡片.
(2) 在石蜡片上加 1 滴至数滴醋酸钠染液,用镊子夹住载网边缘,把贴有切片的一面朝下,时载网浮在液滴上,盖上培养皿染色 5-30min ,染色后尽快用双蒸水清洗 3 次.
(3)用滤纸吸去载网多余的水分,置培养皿内自然干燥.
(4)再将载网放在另一只备有蜡片的培养皿中以同样方法进行柠檬酸铅的染色及清洗,染色后晾干待观察.

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