乳腺主要由腺上皮组成,早期乳汁或断奶后的乳汁含有上皮细胞团块,可用离心法收集上皮细胞（混杂有巨噬细胞）,培养时常用人胚小肠纤维细胞作饲养层,可抑制间质细胞生长.使用优化培养基可使用上皮细胞传代,并形成克隆,在胶原底物上要形成三维立体的复层结构.胰岛素,氢化可的松,霍乱肠毒素, EGF 可促进上皮细胞生长.体外培养中,乳腺上皮细胞具有乳腺细胞的功能,可用于确定免疫标记物类型,这些细胞可被 SV40 病毒转化,可用于研究正常乳腺细胞与乳腺癌细胞的区别,还是研究癌基因引起细胞转化的重要材料.

1 、 操作步骤 

    ① 取材.于产后 2 ～ 7 天在病房收集乳汁,用无菌水擦洗乳头,用手压乳房使乳汁流入无菌容器,每人可收集 10 ～ 20ml 乳汁,以 1 ： 1 的比例与培养基混合,以利离心. 
    ② 以 1000 ～ 1500r/min 离心 20min ,仔细去除上清. 
    ③ 用培养基将细胞清洗 2 ～ 4 次,直至上清液不浑浊为止. 
    ④ 将离心洗涤的细胞沉淀,用培养基 3 ～ 5ml 制成细胞悬液,接种培养瓶（平皿或板）中于 37 ℃ , 5%CO₂ 下培养. 
    ⑤ 3 ～ 5 天更换培养基,换液 2 次后大约 6 ～ 8 天可见克隆形成,并且扩大,开始可见有滋养作用的巨噬细胞,以后逐渐消夫（培养基最好是无血清 MCDB170 ,也可用含牛血清,胰岛素,氢化可的松等的 Eagle 培养基）.
    ⑥ 待细胞长满后,用 0.2% 胰蛋白酶消化 5 ～ 10min ,洗去消化液,以 1 ： 3 比例分瓶僻传代培养.

2 、 用乳腺细胞培养上皮细胞时需注意事项

    ① 尽可能去除脂肪组织,用无钙,镁离子的 PBS 清洗（ 200U/ml 青霉素, 200ug/ml 链霉素） 3 ～ 5 次,将组织剪成碎块,移入离心管,用吹管吸打分散,静置 3 ～ 5min ,使乳腺细胞及细胞团块沉积管底,脂肪,纤维等碎块悬浮上层,吸除上层液,补加洗液重复 3 ～ 5 次,最后用培养基重悬细胞,用 3 ～ 4 层无菌纱布过滤,调整细胞密度后分瓶培养. 
    ② 如果标本中纤维组织较多,可用胶原酶消化法获取细胞. 
    ③ 开始有巨噬细胞存在,可作滋养细胞,随着上皮细胞的生长和克隆形成,巨噬细胞逐渐消失. 
    ④ 培养时可用经照射或用丝裂霉素 C 处理过的 3T3 细胞作饲养层细胞.也可用胶原层,既利于上皮细胞生长,又利于从底层分离. 
    ⑤ 培养基中也可加刺激生长因子如 EGF ,胰岛素,氢化可的松,猪促乳素和前列腺素 E1 等,有利于细胞生长繁殖.