一、接种标本的处理
1 、粪便标本
    用于分离肠道病毒的粪便标本放入装玻璃珠的 40ml 沉淀管内,大约每 2g 粪便用 15mlHanks 液稀释,用橡胶塞紧后剧烈振摇,使粪便乳化,经 2500r/min 离心沉淀 15min 后,将上清用 8 层纱布过滤,于 4 ℃ 以 10000r/min 离心沉淀 1h 再取其上清, 1.8ml 加入 0.2 抗生素进行处理,剩下的悬液保存于 -20 ℃ 备用.
    在 4 ℃ 下经抗生素处理的悬液 1h 后接种 2 管猴肾细胞和人二倍体细胞,每管 0.25ml ,置 37 ℃ 培养观察细胞病变（ CPE ）.如果接种材料毒性大出现非特异的细胞退化,则将培养物尽快传代.
2 、肛门拭子
    肛门拭子擦拭后放在约 2ml 的肉汤内,低温保存,培养前挤出液体于 4 ℃ 下 2500r/min 离心沉淀 15min ,抗生素处理及接种细胞培养方法同上.
3 、咽漱液及鼻咽拭子
    呼吸道病毒常取咽漱液或鼻咽拭子标本,立即接种细胞培养物或保存于 -70 ℃ ,抗生素处理方法同上.
    抗生素处理（ 4 ℃ , 1h ）后,即可接种 2 管以上的细胞培养物,每管 0.2ml , 37 ℃ 培养,观察 CPE( 或血吸附或干扰现象,依病毒种类而定 ) .
4 、组织悬液
    活体检查或尸体解剖取出的组织保存于 -70 ℃ ,取出此组织选择适当的样品放入无菌平皿内称重,然后移入乳钵内,加入含 0.75% 牛血清白蛋白的缓冲液磨成 20% 悬液,若为结缔组织应加入适量铝氧粉研磨.
    此悬液经 1500r/ 皿、离心沉淀 15min ,吸掉上清,取适量标本经 500U/ml 双抗处理,置 4 ℃ 下, 1h 后以 0.1-0.2/ 管接种于 2-4 管细胞上, 37 ℃ 培养,观察 CPE ,必要时也可接种动物.原标本及剩余组织悬液均保存于 -70 ℃ .
二、病毒的细胞培养
    病毒的细胞培养,通常用 人肾细胞（或 Vero 猴肾细胞）, WISH 细胞及 FL 人胚羊膜细胞,人胚二倍体细胞（ WI-38 、 2BS 、 SL8 等）,鸡胚细胞及传代细胞（如 Hela 细胞, Hep-2 细胞和 KB 细胞）等制备单层细胞,病毒感染细胞后,大多引起 CPE ,无需染色可直接在普通光学显微镜下观察,记录时 “+” 代表 25% 以下细胞发生病变, “++” 代表 50% 左右细胞发生病变, “+++” 代表 75% 左右细胞发生病变, “++++” 代表接近 100% 细胞发生病变.不同病毒 CPE 产生的现象不同,有的细胞变园、坏死、破碎或脱落,如滤泡性口腔炎病毒（ VSV ）、 B3 型柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒等.有的只使细胞变园,并堆集成葡萄状,如腺病毒.而麻疹病毒、呼吸道合胞病毒形成多核巨细胞或称融合细胞.有些病毒能使细胞形成包涵体,位于细胞浆内火核内, 1 个至数个不等,嗜酸性或嗜碱性.
    有的细胞不发生细胞病变,但能改变培养基的 pH ,或出现红细胞吸附及血凝现象,有的需用免疫荧光技术或 ELASA 检测.用来分离培养病毒常用的细胞见表.
    大多数病毒最适温度为 35-37 ℃ ,但鼻病毒最是温度为 33 ℃ .至于呼吸道病毒,一般则减低温度为宜,而且以旋转鼓培养为佳,但有的病毒需静置培养,应依病毒种类而定.
三、在细胞培养中病毒作用之识别
    某些接种物对细胞可能有毒性作用,导致细胞退化,若在接种后 24-48h 内出现退化现象,必须进一步传代稀释接种物中可能存在的有毒物质,在预定观察期内,细胞若产生自发退化现象,每批标本的细胞培养物应收获、合并,并进行传代培养,观察 CPE 、包涵体的形成,细胞转化代谢改变等.
四、在单层细胞上滴定病毒
     不同稀释度的病毒液接种细胞后,使组织培养物一半发生退化的最高稀释度称为组织培养物 50% 发生病变的剂量,即 TCID50 .
    TCID50 的测定,首先将病毒用维持液做对数或半对数逐步稀释,每个稀释度接种 4 支以上细胞培养管,接种后的培养物在适宜条件下培养,定期观察 CPE ,如果一半或一半以上的细胞出现 CPE 则视为阳性（或感染）,再计算 TCID50 .
    大多数病毒的中和试验用 100 TCID50 ,其含 100 TCID500 病毒悬液的稀释方法计算如下：
    TCID50 滴度的对数 +2= 含 100 TCID50 病毒悬液之稀释度对数

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