1、取对数生长期细胞一个 T75 或 T25 瓶.

    2、将培养基换成 10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml 秋水仙素的培养基,处理 1~2 小时.

    3、将细胞培养液倒掉,马上加入 3~4ml 0.1% 胰蛋白酶,并立即摇晃 0.5~1min .当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后,马上加入终止液终止消化,并将分裂相细胞收集在一个 15ml 的离心管中,并在 1200r/min 离心 4min .

    4、将上清液倒掉,剩余 50ul 左右的液体在管中,并轻微震动,使细胞沉淀重新悬浮.

    5、加入 10ml 的低渗液（ 0.075M KCL ）,第一毫升要逐滴加入,并边加边摇晃.

    6、 37 ℃ 水浴中低渗 30min .

    7、再加入 1ml 冰冷的固定液（甲醇：乙酸 =3 ： 1 的混合液）,并马上摇匀,离心, 1000r/min、10min .

    8、同步骤 4 .

    9、加入 10ml 冰冷的固定液,第一毫升要逐滴加入,边加边摇晃.

    10、室温下固定 30min ,然后离心, 1000r/min、10min .

    11、同步骤 4 .

    12、加入 10ml 冰冷的固定液,第一毫升要逐滴加入,边加边摇晃.

    13、室温下固定 15min ,然后离心, 1000r/min、10min .

    14、重复步骤 11~13 一次.

    15、将离心后的上清液倒掉,并加入 50~100ul 的新鲜固定液重悬细胞.

    16、滴片（玻片要求是湿冷的干净的,滴片高度要大于 30cm .玻片倾斜角度 15~30 度左右）

    17、镜检.