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FITC标记抗体流程

发布时间 2010-01-06 浏览量 作者: 无 来源: 无

(1)将待交联的蛋白(浓度1mg/ml)对交联反应液透析三次4℃,至pH=9.0.交联反应液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L.
(2)将FITC溶于DMSO中,浓度为1mg/ml.每次交联使用的FITC均应新鲜配制,避光.
(3)按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中,边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀,暗处4 ℃反应8 hr.
(4)加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L, 4 ℃终止反应2 hr.
(5)将交联物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮.
(6)交联物的鉴定
    蛋白浓度(mg/ml) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4
    F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ],该值应介于2.5 ~ 6.5之间. 
(7)FITC交联的蛋白应置于pH7.4的磷酸盐缓冲液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,4℃暗处保存.

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