一、实验目的
    1.了解植物组织中叶绿素的分布及性质.
    2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法.
二、实验原理
    叶绿素广泛存在 于果蔬等绿色植物组织中,并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体.当植物细胞死亡后,叶绿素即游离出来,游离叶绿素很不稳定,对光、热较敏感；在酸性条件下 叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素,在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇.高等植物中叶绿素有两种：叶绿素A和B,两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿.
    叶绿素的含量测定方法有多种,其中主要有：
    1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量,进而间接计算叶绿素的含量.
    2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值,即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量.
    叶绿素A和叶绿素B在645nm 和663nm 处有最大吸收,且两吸收曲线相交于652nm 处.因此测定提取液在645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值,并根据经验公式可分别计算出叶绿素A、叶绿素B和总叶绿素的含量.
三、仪器、原料和试剂
    仪器：分光光度计、电子顶载天平(感量0．01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管.
    原料：新鲜(或烘干)的植物叶片
    试剂：96％乙醇(或80％丙酮)、石英砂、碳酸钙粉
四、操作步骤
    ①取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料,擦净组织表面污物,去除中脉剪碎.
    ②称取剪碎的新鲜样品2g,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及3Ml95％乙醇,研成均浆,再加乙醇10Ml,继续研磨至组织变白.静置3～5min.
    ③取滤纸1张置于漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗,滤液流至100mL 棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中.
    ④用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中.直至滤纸和残渣中无绿色为止.最后用乙醇定容至100Ml,摇匀.
    ⑤取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm 和652nm 下测定吸光度,以95％乙醇为空白对照.
五、计算
    按照实验原理中提供的经验公式,分别计算植物材料中叶绿素A、B和总叶绿素A的含量.
    叶绿素A=（12.7A665-2.69A645）×【V/（1000×W）】
    叶绿素B=（12.7A645-2.69A665）×【V/（1000×W）】
    总叶绿素A=（20.0A645+8.02A665）×【V/（1000×W）】
    或
    总叶绿素A=（A652/34.5）/【V/（1000×W）】

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