一、总RNA提取
1. 取200mg组织,放到1.5ml 离心管中,加入1mlTrizol剪碎.
2. 震荡30s.
3. 加0.2ml氯仿,剧烈摇动30s,室温3min.
4. 12000×g,4℃离心,15min.
5. 吸上层无色水相,移入另一EP管中（约0.5ml）.
6. 加等体积异丙醇,-20℃,30min.
7. 12000×g,4℃离心,10min.在管底部可见微量RNA沉淀
8. 弃上清,加75%乙醇1ml,振荡.
9. 7500×g,4℃离心,10min.
10. 弃上清,用滤纸小心吸取残留液体,室温干燥5-10min.
11. 沉淀溶于20μlDEPC水,取1μl加入79μlDEPC水测OD260/OD280
12. 计算浓度与纯度,-70℃保存.

二、逆转录合成cDNA第一链
    反应体系如下

    混匀快速离心一次


    反应条件如下



    -20℃ 冰箱冻存
三、PCR反应


     混匀快速离心一次
     反应条件如下

    PCR产物-20℃冰箱保存
    取PCR产物8μl 加5×Loading Buffer 2μl 2%琼脂糖凝胶电泳120V.
    100mA 30min 溴化乙锭染色,凝胶成象仪成象并保存结果.