1 、化学合成法：根据蛋白质肽链的氨基酸顺序推知遗传密码,用化学方法人工合成基因.
    美国 Khorana1976 年用化学法首次合成了一种大肠杆菌酪氨酸 tRNA 基因. 270 个核苷酸.转入大砀杆菌中表达,获诺贝尔奖.
    tRNAala 的 DNA 双链的人工合成：
(1) 先合成多核苷酸小片段.
(2) 在缓慢冷却过程中,互补区,段形成双链.
(3) 添加连接酶,促使小段多核苷酸互相连接.
    1977 , K . Itakura 合成生长激素释放因子基因.与 pBR322 质粒连接.在大肠杆菌中产生人脑激素
2 、机械剪切法：
    用机械方法剪切取得具有平整末端的 DNA 片段.例于用超声波断裂双链 DNA .
3、反转录酶法：
    经反向转录酶的作用,以 mRNA 获得与 mRNA 顺序互补的 DNA 单链,然后再复制形成双链 DNA （ cDNA ）.
    例如人的胰岛素和血红蛋白的基因、蚕的丝心蛋白基因.
    步骤：
(1)mRNA 通过寡 dT 柱后,与其它 RNA 分离.
(2) 寡 dT 与 mRNA 的 polyA 尾杂交,作为 5\' 引物.
(3) 反转录酶合成 cDNA , 3\' 端有发夹环.
(4) 碱处理. mRNA 降解.
(5) 以发夹环的 3\' 端作为引物,合成另一条 DNA .
(6)S1 核酸酶切除发夹环.
    说明：
(1) 提取特异 mRNA 的来源常选择特异而高度分化的组织.
(2) 这样获得的基因具有编码蛋白质的全部核苷酸顺序,但与原来位于染色体上的基因在结构上有区别.它们不含有内含子、启动区和终止区域,调控顺列.
(3) 一般还要用同聚物（ dA-dT 或 dG-dc ）接尾法,在 3\'- 末端通过 T4 连接酶接上相应的同聚物.或与人工接头分子连接.
4 、单链酶法：
    获得 rRNA 基因的方法. rRNA 含量较高,解链温度较高.在合适的热变性条件下, A=T 含量多的区段局部打开,经 A1 核酸酶处理,保留 多的区段,再经 CsCl 梯度离心,即能获得 rRNA 基因.
5、限制酶法：
    利用限制酶取得具有粘性末端或平整末端的 DNA 片段.
    基因文库（ gene library ）：用重组体 DNA 技术将某种生物细胞的总 DNA 或染色体的所有片断随机连接到基因载体上,然后转移到适当的宿主细胞中.通过细胞增殖而构成各个片断的无性繁殖系（克隆）,在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下,这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库.
    注意基因文库与基因库和基因克隆的区别：基因库（ gene pool ）是指一生物群体中的全部基因.基因克隆是只包含单个基因或 DNA 片段的克隆.
    限制酶法获取目的基因的优缺点：
(1) 可能获得完整的基因.包括内含子：调控区段和起始、终止区.
(2) 理论上可以获取生物的全部基因,构建基因文库.
(3) 目的基因的筛选、鉴定难度较大.
(4) 有粘性末端,便于重组.

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