MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名：噻唑蓝.是一种黄颜色的染料.? 什么是MTT法? ? 缺点： ? MTT 溶液的配制方法 ? 注意事项 ? MTT法实验步骤 
    MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法.其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等.它的特点是灵敏度高、经济.　
确 MTT法的缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害. 
    MTT法-MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml.因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住.
MTT法-注意事项 MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数.在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内.
　　MTT一般最好现用现配,过滤后4ºC避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解.我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了.
MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
　　配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配,60℃水浴助溶.
    PBS配方： Nacl 8g ,Kcl 0.2g ,Na2HPO4 1.44g ,KH2PO4 0.24g,调pH 7.4 ,定容1L
    MTT法-MTT法实验步骤
　　贴壁细胞：
1、12孔细胞培养板加入5mlRPMI-1640培养基,加入抗凝血0.2ml.收集对数期细胞
2.、调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至106-2*106孔,（边缘孔用无菌PBS填充）.5%CO2,37℃孵育,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况
3.、5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察.
4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml,即0.5%MTT）,继续培养4h.
5、终止培养,小心吸去孔内培养液.
6、每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解.在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值.
7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜）,对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）
　　悬浮细胞：
1、收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D [Actinomycin D是一种最常用的基因转录抑制剂.Actinomycin D可以和DNA的脱氧鸟苷残基形成复合物,从而抑制依赖于DNA的RNA合成,即抑制基因转录.]（有毒性）10ul用培养液稀释 l?g/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔）,共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）.每板设对照（加100?(储存液100 1640）.
2、置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察.
3、每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml,即0.5%MTT）,继续培养4 h.（悬浮细胞推荐使用WST-1,培养4 h后可跳过步骤4）,直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）
4、离心（1000转x10min）,小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解.在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值.
5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜）,对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）,每组设定3复孔.

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