(1).蛋白样品被固定在聚丙烯酰胺凝胶中；
(2). 蛋白质经电转移后,从聚丙烯酰胺凝胶转移到硝酸纤维素膜上；
(3).硝酸纤维素膜孵育在封闭液中把非特异性蛋白封闭；
(4). 于TBST中简单漂洗一次；
(5).硝酸纤维素膜孵育于针对目的蛋白的第一抗体中；
(6).于TBST中漂洗三次；
(7).硝酸纤维素膜孵育于针对第一 抗体的第二抗体中；
(8).于TBST中漂洗三次；
(9). 带辣根过氧化物酶标记的第二抗体与底物反应发出荧光.

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