一、热板法:
【目的】:
    观察度冷丁的镇痛作用.
【原理】:
    利用一定的温度刺激动物躯体的某一部位以产生疼痛反应.把小鼠放在事先加热到55℃的金属盘上,以舔后足为“疼痛”反应指标,以产生痛反应所需的时间为痛阈值.通过测定给药前后痛阈值的变化而反映药物的镇痛作用.
【实验材料】:
1、动物:小鼠(雌性)
2、药品:0.4%盐酸哌替啶溶液、生理盐水.
3、器材:YLS-6A智能热板仪.
【方法与步骤】:
    将智能热板仪温设定为55℃,仪器升温至设定值后,取雌性小鼠若干只,逐一将小鼠置热板仪上,按下计时开关记录时间,观察小鼠对热刺激的反应,以小鼠舔后足作为痛觉指标,一旦出现舔后足动作,再次按下计时开关停止计时,立即将鼠取出.4分钟后重新测试,如果两次痛觉反应均发生在10—30秒内,则为合格.对痛觉过分敏感或迟钝及喜跳窜小鼠,应弃去.将合格鼠两次正常痛觉反应时间的均数算做给药前的平均痛觉反应时间.将挑选合格的小鼠4只称重、标号,分别给各小鼠下列药物:
    甲鼠:腹腔注射0.4%盐酸哌替啶溶液40mg/kg(0.1mL/10g).
    乙鼠:腹腔注射0.1mL/10g生理盐水作对照.
    分别在给药后5、15、30、60分钟各测痛觉反应一次,如小鼠在60秒内不出现痛觉反应,则按60秒计取出实验鼠,不再继续刺激.
【结果与处理】:
    痛阈提高百分率(%)=[用药后痛觉反应时间(均值)-用药前痛觉反应时间(均值)] /
    用药前痛觉反应时间(均值)×100%
    根据给药后不同时间的痛阈提高百分率作图,横坐标表示时间,纵坐标表示痛阈提高百分率,观察度冷丁的镇痛作用,作用起始时间及维持时间.
【注意事项】:
1、水浴温度必须保持在55±0.5℃.
2、热板法小鼠个体差异较大, 应选择痛阈值 在10—30秒之间的实验动物,凡特别喜跳跃的小鼠应淘汰.
3、实验应选择雌性小鼠,因雄性小鼠在遇热时睾丸下降,阴囊触及热板反应过敏,易致跳跃,影响实验准确性.
4、室温以15—20℃为宜.
5、作用较弱的镇痛药此法不太敏感.


二、鼠尾压痛法:
【目的】:
    观察药物的镇痛作用,掌握小鼠或大鼠尾压痛法实验方法.
【原理】:
    采用机械性施压刺激致痛,当动物给与刺激至出现鸣叫或挣扎时,此刺激强度即为痛阈.
【实验材料】:
1、动物:小鼠
2、药品:0.4%盐酸哌替啶溶液、6%乙酰水杨酸混悬液、生理盐水.
3、器材:YLS-3E电子压痛仪
【方法与步骤】:
    将大鼠或小鼠尾部置于YLS-3E电子压痛仪,当动物安静后,按“开始”键或踏下脚踏开关,压头下行施压,当动物出现疼痛反应(鸣叫或挣扎)时,再按“开始”键或踏下脚踏开关压头回位,显示屏显示施压数据(克),即为该动物对机械刺激的最大耐受程度(痛阈),观察给药前后动物痛阈的变化.动物药物处理和测定时间同痛热板法.
【结果与处理】:
    同热板法.
【注意事项】:
1、动物须安静后开始给与刺激测定痛阈；
2、注意观察和确定动物疼痛时的嘶叫声和挣扎的标准(确定痛反应的标准).

三、光照甩尾法:
【目的】:
    观察药物的镇痛作用,掌握小鼠或大鼠光照甩尾镇痛实验方法.
【原理】:
    鼠尾光照甩尾镇痛方法是通过固定强度的光束,持续照射到鼠尾产生集热效应,使鼠尾局部温度升高从而产生疼痛.当灼热产生的疼痛超过动物能忍受的痛阈时,动物会以甩尾来回避疼痛,以甩尾作为判断痛阈改变的指标,是镇痛药物筛选的物理性致痛方法之一.
【实验材料】:
1、动物:小鼠
2、药品:0.4%盐酸哌替啶溶液、生理盐水.
3、器材:YLS-12A鼠尾光照测痛仪
【方法与步骤】:
    将大鼠或小鼠放入鼠固定器内,露出鼠尾然后紧固.待动物安静后,将尾部摆放在测痛仪光电控制探头中间的出光孔上,测定指示灯出现慢闪动,按“开始”键或踏下脚踏开关,计时开始,当鼠尾受热刺激疼痛摆动时,光源自动关闭,停止计时,锁定数据(痛阈值)并记录给药前后动物痛阈的变化.动物药物处理和测定时间同痛热板法.
【结果与处理】:
    同热板法.
【注意事项】:
    注意区别鼠尾自然摆动与痛刺激时甩尾的差异；


四、化学刺激法:
    许多刺激性化学物质(如醋酸、酒石酸锑钾、缓激肽、钾离子等)腹腔注射刺激腹膜,均能使动物产生疼痛反应,可用作疼痛模型,研究疼痛生理及筛选镇痛药物.其中小鼠扭体法最常用.
【目的】:
    观察药物的镇痛作用,掌握小鼠扭体法实验方法.
【原理】:
    小鼠腹腔注射一定容积和浓度的化学物质,由于刺激腹膜而致小鼠出现腹部收缩内凹、躯干与后肢伸张、臂部高举等行为反应,称为扭体反应.镇痛药可抑制这种反应.
【方法与步骤】:
    取体重18-22g的健康小白鼠3只,称重,编号. 甲鼠腹腔注射0.4% 盐酸哌替啶溶液40mg/kg(0.1mL/10g). 乙鼠灌胃给6% 乙酰水杨酸混悬液600 mg/kg(0.1mL/10g).丙鼠腹腔注射0.1mL/10g生理盐水作对照.给药后30min,各鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2mL/只,观察10min内产生扭体反应(腹部收缩内凹、躯干与后肢伸张、臂部高举)的动物数.
【结果与处理】:
    收集全实验室结果,按下列公式计算药物镇痛百分率:
    药物镇痛百分率(%)=[实验组无扭体反应动物数—对照组无扭体反应动物数] /对照组无扭体反应动物数×100%
【注意事项】:
1、醋酸溶液(也可用1%酒石酸锑钾溶液)宜新鲜配制.
2、室温宜恒定于20℃,过高或过低均不易发生扭体反应.
3、给药组扭体动物数比对照组减少50%以上才能认为有镇痛作用.

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