目的要求：
1、练习解剖果蝇幼虫和分离果蝇唾腺的方法.
2、掌握唾腺染色体的制片技术.
3、了解唾腺染色体的结构及其变异特点.

实验原理：
    果蝇唾腺染色体是永久性间期染色体,由于间期染色体不螺旋化,而且DNA不断地进行复制,细胞并不进行分裂,这样就使唾腺染色体变成了巨大染色体(多线染色体).唾腺染色体可以比果蝇其它细胞染色体大几百倍.果蝇唾腺染色体能进行体细胞配对(拟联会),配对时所有染色体的着丝点聚集在一起形成染色中心,同源染色体的两条臂紧密配合自由伸展.因此,在唾腺细胞里,查不出2n的染色体数目,只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂.与其它细胞染色体相比的另一个特点是,唾腺染色体上有深浅不同,宽窄不一的带纹.这些带纹的数目和位置是恒定的,代表着种的特征和一些基因的位置.由于这些带纹的存在,染色体上发生缺失,重复,倒位,易位等很容易在唾腺染色体上识别出来.

试剂和器材：
1、材料：
    果蝇 (Drosophila virilis 染色体数目2n=12) 三龄幼虫.这种果蝇幼虫比黑腹果蝇(Drosophila melanogaster染色体数目2n=8)幼虫个体大,唾腺大,脂肪少,便于操作和观察.
2、试剂：
    乙醚,丙酸,酵母粉,绵白糖,琼脂条,玉米粉,1mo1/L HC1,0. 85%NaC1,石炭酸品红,蒸馏水.
3、器材：
    恒温培养箱,高压灭菌锅,显微镜,天平,培养瓶,棉花塞,滤纸片,载片,盖片,镊子,解剖针

操作方法：
1、三龄幼虫培养：
    实验前将果蝇(D.virilis),转接到新配制的培养基中,放在23～25℃的条件下饲养约10天左右.为了让果蝇幼虫长得肥大更便于操作,在实验前一天,将溶解好的酵母液添加在培养基里,添加前要先把培养瓶中的成虫转移掉.添加的数量因培养基的情况而定,一般约0. 5～l mL.
2、解剖幼虫：
    取一洁净的载片,滴上2滴生理盐水.在瓶壁上挑选肥大,行动迟缓的三龄幼虫放在生理盐水中,这时生理盐水如果很混浊,要更换生理盐水或把幼虫转移到另一张载片上.唾腺位于幼虫头部两侧,长度约占身体总长1/3～1/4左右.解剖时要用解剖针压住头部,压住的地方越小越好.用镊子夹住幼虫身体后2/3部分, 将幼虫在身体前端拉开.


    唾腺是半透明的囊状物,会飘浮在生理盐水里,无沦怎样触动都不发生形状改变.唾腺找到以后,用解剖针将唾腺与其它组织分开,只留唾腺在载片上.在显微镜下观察,唾腺仍呈半透明状态,由单层细胞构成,细胞形状不规则,细胞轮廓清晰,细胞大,细胞核也大,甚至可以看清楚细胞核是由染色体卷缩在一起形成的,一个唾腺约几十个细胞构成.
3、解离：
    用滤纸条吸净唾腺周围的其它物质,然后在唾腺上滴上1mol/L HC1解离2～3min,以解除细胞间联系,便于染色体散开.
4、水洗：
    解离后的唾腺用蒸馏水洗3~4次,水洗时要注意不要把唾腺弄丢,水洗要彻底,否则影响染色效果.另外,水洗过程也是细胞低渗过程.
5、染色压片：
    水洗后的唾腺周围要用滤纸条清理干净,然后在唾腺上滴上一滴石炭酸品红,染色5min后盖上盖片,先用滤纸吸去盖片周围溢出的染液,最后在有材料的位点上用力压实.
6、显微镜观察：
    先用低倍镜观察,发现分散好的染色体图像后再转换至高倍镜观察.
    果蝇(D. virilis)的体细胞染色体数2n=12,全部为端部着丝点.其中有5对染色体臂较长,一对染色体臂很小是点状染色体.唾腺染色体是5条长臂,点状染色体附着在染色中心附近.另外,在染色体臂上有明显深浅不同,宽窄不一的带纹.在染色体臂的不同部位有时会出现疏松区(胀泡),这是转录活性区.
    遗传学实验室饲养的果蝇(D. virilis) 唾腺染色体中,常见某一条染色体局部区域出现不联会的分叉或分枝现象,该区域的带纹彼此间也存在明显差异.这表明,这对同源染色体之间存在着遗传上的差异.关于这种差异产生的畸变原因是否与某种环境因素有关,目前尚不清楚.

相关阅读
紫萼玉簪染色体结构变异的显微镜观察 
果蝇唾腺染色体制片与染色体畸变观察
植物细胞的质体与有丝分裂 
植物多倍体诱发实验