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酵母遗传学方法:酵母活体染色

发布时间 2010-01-22 浏览量 作者: 无 来源: 无

1)核DNA和线粒体DNA:
1.当细胞培养到约107细胞/ml时,离心(5秒)收集细胞,再悬浮在70%乙醇中.
2.固定5分钟或5分钟以上,用水洗2次.
3.将细胞悬浮在含有50ng/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中.1mg/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚母液可在-20℃下贮存.
4.用紫外滤片观察.

2)线粒体:
1.在生长培养基中培养细胞达到约107细胞/ml时,加入100ng/ml 3,3\'-二已基噁羰花青碘化物(DiOC6,Sigma D3652或Molecular Probes)用乙醇把1mg/ml母液稀释到1/104.
2.培养5分钟或5分钟以上,用荧光素滤片观察.

3)液泡:
1.当细胞生长到约107细胞/ml时,离心收集细胞(5秒),悬浮在含有50mmol/L柠檬酸钠(pH4.0)的YPD中.
2.加CDCFDA(羧基-2\',7\'-二氯-荧光素双乙酸盐)到终浓度为10μmol/L.
3.保温10分钟或10分钟以上,用荧光滤片观察.

4)牙痕和几丁质:
1.用生长培养基培养细胞达107细胞/ml时,加100μg/ml Calcofluor(荧光发光剂28; Sigma F3543)(用水将1mg/ml母液稀释到1/10,母液可在-20℃下黑暗保存数星期).
2.培养5分钟或5分钟以上,用水洗2次,用紫外滤片观察.

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