一、目的
    学习应用秋水仙碱诱变园艺植物染色体加倍的操作技术,以及掌握染色体倍性鉴定的常用方法.
二、材料和设备
    黄瓜种子以及幼苗；秋水仙碱、二甲基亚矾（DMSO）、聚乙二醇（PEG）；蒸馏水,小滴管,50ml量筒,100ml容量瓶,卷尺、放大镜等.
三、说明
    应用化学诱变剂诱导植物产生变异,进行选择育种的方法是化学诱变育种.化学诱变育种分为两类,一类是诱导产生多倍体,常用的试剂是秋水仙碱（Colchicine）；另一类是诱发基因突变或染色体断裂,如甲基磺酸乙酯等烷化剂.前者的应用较多、较广泛.
    秋水仙碱是从百合科植物秋水仙中提取出来的植物碱,极毒,易溶于冷水和酒精中.用于园艺植物诱变育种的秋水仙碱的有效浓为0.1%～1%,以0.2%最有效.秋水仙碱诱变是通过阻断纺锤体的正常形成,使染色体不能分离而导致加倍.由于有效诱变只发生在细胞分裂状态活跃的细胞、组织,所以常用萌动或萌发的种子、幼苗或生长旺盛的茎尖作为诱变材料.二甲基亚矾（DMSO）具有改善细胞膜的透性,可以促进植物对秋水仙的吸收；聚乙二醇（PEG）可以提高细胞的渗透压,利于细胞吸收秋水仙,因此,它们常被用作秋水仙诱变的增效剂.
四、方法及步骤
1、药剂配制
    可以先用少量酒精溶解秋水仙粉剂,然后定容到所需的浓度；或直接用冷的蒸馏水配制.实验设计的浓度为0.2%和0.5%.秋水仙羊毛酯剂,不同浓度的秋水仙水溶液3～4,羊毛脂6,充分搅匀,到看不见游离的水溶液为止.
2、诱变
①滴苗：在两片真叶刚吐出（两叶一心）时,分别用0.2%的秋水仙、0.2%秋水仙+1.5%DMSO、0.5%秋水仙、0.5%秋水仙+1.5%DMSO每天8：00和18：00滴生长点.为了减少秋水仙滴落和蒸发,可用脱脂棉置于生长点上,并在滴后遮盖遮阳网.连续处理5天.20天后,统计成活株和变异株.每种处理至少50株.
②浸种：用0.2%、0.5%、0.2%秋水仙+1.5%DMSO和0.5%秋水仙+1.5%DMSO的秋水仙碱分别浸渍（用湿纱布包裹种子）已经催芽尚未露白的种子6hr、12hr和24hr.每种处理至少50株.然后播种在营养钵中.1周后统计出苗株和变异株.
③四倍体的鉴定：在变异株中鉴定.本实验以间接鉴定为主,直接鉴定为辅.间接鉴定是与二倍体植株相比,同一基因型的四倍体特征如下：生长缓慢；叶片肥厚、色深,叶片较宽或较大,有皱折；茎较粗壮,节间变短；花冠明显增大,花色较重.在显微镜下观察比较变异株和对照株的气孔数目和大小,以及花粉粒的形态.四倍体植株的气孔,通常数目变少,但气孔变大；出现畸形花粉粒和4个萌发孔的花粉粒.果实结籽率低.直接鉴定是由1～2位同学利用卷须观察体细胞染色体数目,确证是否是2n=28.

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